W pracy badano efektywność izolacji liniowych plazmidów dsDNA z komórek drożdży D. hansenii po zastosowaniu enzymatycznych metod protoplastyzacji, mechanicznych technik dezintegracji oraz chemicznej lizy komórek. Wykorzystane w procesie protoplastyzacji lytikaza z Arthrobacter luteus oraz mieszanina enzymów litycznych z Trichoderma harzianum umożliwiły efektywną izolację liniowych plazmidów. Lytikaza okazała się enzymem najszybciej lizującym ścianę komórkową, podczas gdy zaletą enzymów T. harzianum była czystość otrzymanego preparatu DNA. β-glukuronidaza nie powodowała wydajnego trawienia ściany komórkowej, przez co uznana została za nieodpowiednią do tego procesu. Wszystkie metody mechaniczne (rozcieranie kulkami szklanymi, mikrotłoczkami, mrożenie w ciekłym azocie, rozbijanie w Mikro-Dismembratorze) okazały się w pełni użyteczne do izolacji plazmidów w przeciwieństwie do metod chemicznych. Standardowo stosowana do izolacji plazmidów kolistych metoda lizy alkalicznej z SDS powodowała utratę plazmidów, natomiast CelLytic Y Cell Lysis Reagent prowadził do otrzymania wysoce zanieczyszczonych próbek.
AKTYWNOŚĆ HYDROLITYCZNA DROŻDŻY IZOLOWANYCH Z SERÓW ROKPOL
Autor
Piotr Juszczyk, Marek Szołtysik, Agata Czajgucka, Barbara Żarowska, Xymena Połomska, Maria Wojtatowicz, Józefa Chrzanowska
Strony
17–26
Słowa kluczowe
drożdże, aktywność proteolityczna, aktywność lipolityczna, ser Rokpol
Streszczenie
Pokaż streszczenie
Przedmiotem badań była ocena zdolności 113 szczepów drożdży wyizolowanych z polskich serów z przerostem pleśni do produkcji zewnątrzi wewnątrzkomórkowych enzymów proteolitycznych i lipolitycznych. Hodowle drożdży należących do 7 gatunków: Candida famata, C. sphaerica, C. intermedia, C. kefyr, Geotrichum penicillatum, Yarrowia lipolytica i Saccharomyces kluyveri prowadzono metodą wstrząsaną w podłożu zawierającym ekstrakt drożdżowy-kazeinę-glukozę (YCG). Oznaczano zewnątrzkomórkową aktywność endopeptydazową w pH 3,0 i 7,5, odpowiednio wobec kwasowo zdenaturowanej hemoglobiny i kazeiny jako substratów. Obok zewnątrzkomórkowej aktywności proteolitycznej badano także aktywność wewnątrzkomórkową. Ocenie poddano również aktywność karboksypeptydazową, di-, tripeptydazową oraz aminopeptydazową drożdży. Aktywność zewnątrzi wewnątrzkomórkowych lipaz oznaczano metodą studzienkową.
ALERGICZNE WŁAŚCIWOŚCI OWOCÓW I WARZYW ORAZ MOŻLIWOŚCI ICH ELIMINOWANIA METODAMI TRADYCYJNYMI I BIOTECHNOLOGICZNYMI
Autor
Maria Trzcińska
Strony
27–34
Słowa kluczowe
alergeny owoców i warzyw, profiliny, białka zapasowe, odmiany hipoalergiczne
Streszczenie
Pokaż streszczenie
Przedstawiono krótki przegląd występujących w owocach i warzywach, wywołujących uczulenia, profilin i białek zapasowych. Zwrócono uwagę na reakcje krzyżowe pomiędzy omawianymi alergenami a homologicznymi białkami obecnymi w pyłkach popularnych roślin. Na koniec omówiono kierunki badań, których celem jest poszukiwanie hipoalergicznych odmian owoców i warzyw.